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Gentechnik: Die Sequenzanalyse
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- Schneiden der zu untersuchenden Sequenzmit Restriktionsenzymen und Vermehren durch Klonierung oder PCR
- Denaturieren (d.h. in Einzelstränge Zerlegen)
- In vier Ansätzen mit Primer, teilweise radioaktiv (oder fluoreszenz) markierten Nukleotiden, Polymerase und einer geringen Konzentration(so groß ,dass pro Strang eines eingebaut wird) von je einem Abbruchnukleotid versetzen
--> Es entstehen unterschiedlich lange, radioaktive Doppelketten die aber immer mit einem ansatzspezifischen Nukleotid enden.
- Ansätze nebeneinander auf Gelelektrophoreseplatte auftragen
- DNA wandert von - nach + (wg. negativer Phosphogrp.), kürzere DNA-Stücke schneller als lange Stücke
- Fixieren und Übertragen auf Folie und übertragen auf fotographisches Medium
- Ablesen von + nach - (5' nach 3 ')
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